Czym jest test ELISA (enzymatyczny test immunosorpcyjny)?

ELISA, czyli enzymatyczny test immunosorpcyjny, to technika testowa oparta na płytkach zaprojektowanych do wykrywania i ilościowego oznaczania rozpuszczalnych substancji, takich jak peptydy, białka, przeciwciała i hormony. Sprawdźmy, jak wykonuje się testy ELISA i jak wyglądają kolejne etapy procedowania,

Testy ELISA – na czym polega fenomen tego testu enzymatycznego?

Enzymatyczny test immunosorbentu (ELISA) to skuteczna metoda wykrywania i oznaczania ilościowego konkretnego białka w złożonej mieszaninie. Metoda ta umożliwia analizę próbek białka unieruchomionych w studzienkach mikropłytek przy użyciu specyficznych przeciwciał. Testy ELISA są zwykle wykonywane na 96-dołkowych lub 384-dołkowych płytkach polistyrenowych, które pasywnie wiążą przeciwciała i białka. To właśnie to wiązanie i unieruchamianie odczynników sprawia, że ​​testy ELISA są łatwe do zaprojektowania i wykonania.

Dlaczego testy ELISA są tak niezwykłe?

Unieruchomienie reagentów testu ELISA na powierzchni mikropłytki ułatwia oddzielenie materiału związanego od niezwiązanego w czasie wykonywania testu. Ta zdolność do stosowania przeciwciał o wysokim powinowactwie i zmywania niespecyficznych związanych materiałów sprawia, że ​​ELISA jest potężnym narzędziem do pomiaru określonych analitów w surowym preparacie.

Na czym opiera się test ELISA?

Chociaż opracowano wiele wariantów testu ELISA i zastosowano je w różnych sytuacjach, wszystkie wykorzystują ten sam schemat pracy. Pierwszym etapem pracy jest przechwytywanie bezpośrednie lub unieruchomienie pośrednie antygenów na powierzchni studzienek mikropłytek polistyrenowych. W dalszym etapie dochodzi do zablokowanie płytek poprzez dodanie nieistotnego białka lub innej cząsteczki w celu pokrycia wszystkich nienasyconych miejsc wiązania powierzchni w studzienkach mikropłytki. Po sondowaniu, które ma na celu weryfikację wiązań antygenowych, odbywa się pomiar sygnału, czyli wykrywanie sygnału generowanego przez bezpośredni lub wtórny znacznik na określonym przeciwciele.

Znaczniki enzymatyczne w teście ELISA

Najczęściej stosowanymi znacznikami enzymatycznymi są peroksydaza (HRP) i fosfataza alkaliczna (AP). Firmy, zajmujące się dystrybucją preparatów medyczno-biologicznych, takie jak Gentaur Sp. z o.o., udostępniają duży wybór substratów do przeprowadzania testu ELISA z koniugatem HRP lub AP. Wybór substratu zależy od wymaganej czułości testu i dostępnego oprzyrządowania do wykrywania sygnału (spektrofotometr, fluorometr lub luminometr).